質(zhì)粒是基因工程中常用的運載體,擔負著將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細胞中的重要使命。高速離心機對從細菌中分離質(zhì)粒有非常重要的作用。以下是一實驗室質(zhì)粒提取的步驟,使用蜀科TD-20高速離心機進行操作:
1、將擴增好的菌液重懸,轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中;
2、用質(zhì)粒小量抽提試劑盒,按說明書要求提取質(zhì)粒;
3、細菌高速離心1min,*去除上清;
4、加入250ulRB溶液,振蕩器充分懸浮細菌;
5、加入250ulLB溶液。立即上下顛倒10次,使細菌裂解,室溫,放置2min;
6、加入250ulNB溶液。立即上下顛倒10次,使之充分中和,室溫,放置2min;
7、室溫,15000rpm,蜀科高速離心機離心15min;
8、將吸附柱放入收集管內(nèi),離心得到的上清轉(zhuǎn)移吸附柱,室溫,15000rpm,蜀科高速離心機離心30s;
9、棄廢液,將吸附柱放入收集管,加入700uL WB溶液到吸附柱中,15000rpm,蜀科高速離心機離心30s;
10、重復上一操作;
11、將吸附柱放入干凈的1.5mL離心管中,加30-50uL預(yù)熱的Elution Buffer,室溫,放置2min,高速離心1min;
12、樣品進行電泳檢測:1%瓊脂糖凝膠電泳,上樣量為2uL,紫外燈下觀察,明亮的帶為超螺旋形式,可以在一定程度上表明提取質(zhì)粒的純度。
質(zhì)粒提取是基因工程基礎(chǔ)的一步,高速離心機的運用非常頻繁,蜀科高速離心機全系采用轉(zhuǎn)頭識別技術(shù),有效防止轉(zhuǎn)頭超速運轉(zhuǎn),保護機器和人員安全,技術(shù)性能位居*,歡迎選購!
聯(lián)系我們
四川蜀科儀器有限公司 公司地址:四川省成都市溫江區(qū)海旺路99號5號樓 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)掃一掃 更多精彩
微信二維碼